細胞凋亡是指為維持有機體內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。正常情況下任何細胞在形成過程中發生的異常都會通過凋亡消除。例如體內的癌細胞增長為腫瘤的過程會受細胞凋亡的引導而被抑制。然而在抑癌基因p53出現問題時，凋亡就不會誘導發生，從而導致癌細胞的不斷增長。細胞凋亡可以通過細胞形態的變化或生物化學的變化來檢測。目前常用的指標有caspase活性變化、DNA碎片、磷脂酰絲氨酸的外翻等。AnnexinV染色的細胞可以用于檢測細胞凋亡早期的細胞膜變化。在細胞凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸由脂膜內側翻向外側。AnnexinV是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜特異性結合，因此AnnexinV被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。用綠色熒光FITC標記的AnnexinV通過流式細胞儀或熒光顯微鏡可以檢測到細胞凋亡的發生。
 

　　凋亡試劑盒的操作流程：
 

　　(Ⅰ)誘導凋亡的操作步驟  1.制備細胞(Jurkatcell)懸液(1×106cells/ml)2.加入終濃度為1μg/ml的凋亡誘導劑(Staurosuporine)3.在37℃下培養3.5h。*Staurosuporine用于誘導Jurkatcell凋亡。較佳誘導條件請根據實驗的細胞類型與誘導劑調整。
 

　　(Ⅱ)AnnexinV染色操作步驟：
 

　　1.將細胞懸液轉移到離心管中，1,000rpm離心3min，取出上清液。
 

　　2.加入PBS，1,000rpm離心3min，去除上清液。再重復本步操作一次。
 

　　3.用之前準備好的1×AnnexinVBindingSolution制備細胞終濃度為1×106cells/ml的細胞懸液。細胞懸液體積根據實驗目的自行調整，一般推薦不少于500μl細胞懸液。
 

　　4.取100μl步驟3中制備的細胞懸液，加入到一個新的tube中。
 

　　5.向細胞懸液中加入5μlAnnexinV,FITC結合物，再加入5μlPISolution。
 

　　6.室溫下避光培養15min。
 

　　7.加入400μl1×AnnexinVBindingSolution，請在在1小時內檢測。