常用抗體的應(yīng)用范圍及選用

在臨床活檢工作中，對(duì)于各種腫瘤的正確判斷，歷來(lái)是外科病理學(xué)的核心問(wèn)題。因它關(guān)系到患者的治療和預(yù)后的問(wèn)題。在免疫組化技術(shù)沒開展以前，主要靠HE，特殊染色和組織化學(xué)來(lái)進(jìn)行鑒別和診斷各種腫瘤，這些在當(dāng)時(shí)雖然解決了不少的問(wèn)題，但是對(duì)于較為復(fù)雜，較為多型性的腫瘤，就不能對(duì)其起源及所含的成分作出正確的判斷。隨著免疫組化工作的開展，給許多以往有待于解釋原因的病理診斷上帶來(lái)了福音。許多以往無(wú)法解釋原因的病例，經(jīng)現(xiàn)今免疫組化染色技術(shù)的處理后，能夠?qū)ζ淦鹪矗嚓P(guān)的抗原或抗體成份給予顯示出來(lái)，為腫瘤的診斷提斷了形態(tài)學(xué)的依據(jù)。雖然如此，對(duì)于一些較為復(fù)雜的抗原，就要根據(jù)具體情況作具體分析。在生物界里面某些細(xì)胞僅具有一個(gè)抗原的決定簇，這是極少見的，而常見的是具有數(shù)百個(gè)乃至數(shù)千個(gè)的抗原決定簇。數(shù)量之多但又不是千篇一律，并非都在細(xì)胞的表面表達(dá)出來(lái)，加上細(xì)胞的排列有高有矮，有長(zhǎng)有短，切片時(shí)有的被切到細(xì)胞膜，有的被攔腰斬?cái)啵虼嗽谝粡埱衅峡吹降耐环N抗原的表達(dá)也不一致，有的在細(xì)胞核，有的在細(xì)胞膜，也有的在細(xì)胞漿，這種現(xiàn)象是由于切片的原因所致。但是，抗原的表達(dá)，在原來(lái)的表達(dá)上就有核、漿、膜之分。有的抗原可在一個(gè)部位表達(dá)，有的抗原 則可在兩個(gè) 部位表達(dá) ，例如PCNA，它可以在細(xì)胞核表達(dá)，也可在細(xì)胞漿表達(dá) 。有的抗原，可表現(xiàn)為雙向表達(dá)，如上皮（樣）腫瘤間皮腫瘤和滑膜內(nèi)瘤等，用角蛋白標(biāo)記時(shí)，可有陽(yáng)性表達(dá)，用波形蛋白標(biāo)記時(shí)，也可有陽(yáng)性表達(dá)。對(duì)于上述的許多現(xiàn)象，在觀察檢測(cè)時(shí)，就要特別地小心，不斷地積累經(jīng)驗(yàn)，以便于更好地鑒別各種抗原的所在部位。某些抗原不是在任何時(shí)候能表達(dá)出來(lái)的它們 需要一定的時(shí)間和條件。有人根據(jù)腫瘤細(xì)胞增生的能力將其分為三個(gè)階段：
1.進(jìn)入細(xì)胞周期的增殖細(xì)胞，這包括G1、G2及M期的細(xì)胞。
2.暫時(shí)未進(jìn)入細(xì)胞周期，但在某特定的時(shí)期和條件下，使其開始增殖的細(xì)胞（GO期）。
3.靜止的再進(jìn)入增殖周期的細(xì)胞，這些細(xì)胞己分化成熟，根據(jù)新陳代謝的規(guī)律，它們逐漸地進(jìn)行消之階段。
上述三個(gè)階段中，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系z(mì)ui為密切的是增殖細(xì)胞。因此，臨床檢測(cè)各種腫瘤抗原的表達(dá)，應(yīng)根據(jù)上述 三個(gè)階段來(lái)加以區(qū)別，仔細(xì)加以分析，在作出診斷前，應(yīng)根據(jù)免疫組化的表達(dá)，細(xì)胞的分化成度來(lái)加以區(qū)別，不要以為用了某種抗體抗原不表達(dá)就確定是不屬該抗體來(lái)源的腫瘤。有人在檢測(cè)淋巴瘤活性的研究中，發(fā)現(xiàn)PCNA在細(xì)胞周期的S期數(shù)量增高，G2期下降，核分裂期zui低，在 G1期又開始增高。我們?cè)跈z測(cè)各種腫瘤的抗原時(shí)發(fā)現(xiàn)，在同一病例中，增生的腫瘤細(xì)胞抗原表達(dá)強(qiáng)，成熟的細(xì)胞表達(dá)與增生的細(xì)胞差不多，幼雅的細(xì)胞表達(dá)較弱，未分化的細(xì)胞呈陰性。基于上述的情況，我們應(yīng)充分認(rèn)識(shí)到，診斷各種腫瘤，免疫組化起到了重要的作用中，它可以為診斷提供可靠的準(zhǔn)確的形態(tài)學(xué)依據(jù)，它為腫瘤的來(lái)源的定性，提供了理論及實(shí)物。但是，我們也應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，任何事情都 不能有的準(zhǔn)確，免疫組化的檢測(cè)也一樣，有時(shí)也會(huì)受到未分化細(xì)胞的制約，因此，在作出診斷前，應(yīng)多做多方面的檢查，結(jié)合各方面的情況，作出正確的判斷。為了更好地應(yīng)用各種抗體來(lái)檢測(cè)相應(yīng)的抗原，下面我們將介紹常用抗體檢測(cè)范圍。

（一）、常用上皮組織及腫瘤標(biāo)記物
1.角蛋白（Keratin）
角蛋白分為表皮角蛋白和細(xì)胞角蛋白兩種，這是根據(jù)其分部的部位而分的。表皮角蛋白包括皮膚表皮，消化道粘膜上皮、腺上皮甲狀腺濾泡上皮、氣管、支氣管上皮、肺泡上皮，角膜上皮、前列腺上皮等。細(xì)胞角蛋白包括頜下腺，胰腺，胸腺，細(xì)胞，肝細(xì)胞，腎小管細(xì)胞等。目前，應(yīng)用上述細(xì)胞中間絲角蛋白作為抗原所制備的抗體有單克隆抗體和多克隆抗體。角蛋白可有19個(gè)亞型 ，分為堿性和酸性，從1-8為堿性，9-19為酸性，分子量40-68不等，復(fù)層鱗上皮多為高分子量，單層上皮則多為低分子量，了解這些在臨床的鑒別診斷及抗體的應(yīng)用中都 有極大的幫助。目前，檢測(cè)這類特質(zhì)的抗體很多，根據(jù)不同的克隆生產(chǎn)出不周類型的抗體。常用的抗體有：
①單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白（Monoclonal mouse anti human cytokeratin）克隆為MNF116。
該抗體應(yīng)用范圍，各類的冰凍切片，涂片，細(xì)胞培養(yǎng)片和經(jīng)甲醛固定石蠟包埋的組織切片 。用本抗體檢測(cè)的陽(yáng)性組織有：鱗狀上皮，甲狀腺濾泡上皮消化道上皮，胰腺膽管上皮，肝膽管上皮，角膜上皮等以及發(fā)生于上述來(lái)源的腫瘤。應(yīng)該注意的是有一些腫瘤在檢測(cè)時(shí)，可出現(xiàn)兩種陽(yáng)性物，即用兩種抗體來(lái)檢測(cè)如采用CK和Vimentin，可出現(xiàn)雙向表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤有：癌內(nèi)瘤，子宮內(nèi)膜腺癌肺腺癌，上皮樣內(nèi)瘤，滑膜內(nèi)瘤，唾液腺肌上皮瘤，間皮瘤等等。這是由于在這些腫瘤中存在著兩種不同的中間絲的緣故。
應(yīng)用該抗體檢測(cè)呈陰性的腫瘤有：各種淋巴瘤，各類肌源性的腫瘤，惡性黑色素瘤，骨腫瘤，纖維組織腫瘤，脂肪腫瘤，神經(jīng)組織腫瘤和精原細(xì)胞瘤等。
在檢測(cè)某些腫瘤時(shí)，常可出現(xiàn)這樣的問(wèn)題，在同一張切片上，同樣的鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞，有的抗原表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性，有的表達(dá)為中度陽(yáng)性性，有的表達(dá)為弱陽(yáng)性，甚至有的呈陰性。這主要是由于各種細(xì)胞處于增生的不同階段，細(xì)胞分泌的抗原量不同，因而表達(dá) 也不同。
該抗體可用各種方法檢測(cè)，但用真空負(fù)壓LSAB法。產(chǎn)品說(shuō)明書注明該抗體稀釋度1：50至1：100，我們使用為1：100。
②單克隆小鼠抗人細(xì)胞角蛋白，克隆為L(zhǎng)P34。該抗體的使用范圍，檢測(cè)各種組織基本上與①號(hào)抗體相同，但效果不如①號(hào)。
③單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白，克隆為35BH11。該抗體的特點(diǎn)是：A，可檢測(cè)幾乎所有的非鱗狀上皮包括卵巢腺癌，胃腸道腺癌，甲狀腺癌，肝癌， 子宮癌，腎癌等。B、不與鱗狀上皮起反應(yīng)。C、對(duì)膀胱癌，鼻咽癌，胸腺癌等部分陽(yáng)性。但是，該 抗體只能用于冰凍切片 ，涂片和細(xì)胞培養(yǎng)片。不能用于石蠟切片 。
④單克隆小鼠抗 人細(xì)胞角蛋白，克隆34BE12。該 抗體屬于高分子量類型，它可檢測(cè)鱗狀上皮管上皮和 復(fù)層上皮的組織及其來(lái)源的腫瘤。
適用范圍：可用于各種類型的切片 。
2.單克隆小鼠抗人上皮細(xì)胞膜抗原 （Monoclonal mose anti human epithelial memberance antigen,EMA）
上皮細(xì)胞膜抗原是上皮細(xì)胞表面大分子糖蛋白物質(zhì)，它不僅存在于各種上皮，以及各種上皮來(lái)源的腫瘤，也可存在于部分非上皮及其來(lái)源的腫瘤，如漿細(xì)胞，組織細(xì)胞等。
應(yīng)用EMA來(lái)檢測(cè)正常的組織時(shí)，其陽(yáng)性表達(dá)主要在細(xì)胞膜上，但在檢測(cè)腫瘤時(shí)，這種陽(yáng)性物不僅在細(xì)胞膜上出現(xiàn)，也可在細(xì)胞漿中見到。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞在分化增生時(shí)，陽(yáng)性物表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性。當(dāng)腫瘤細(xì)胞趨于成熟或已成熟時(shí)，陽(yáng)性物表達(dá)較弱，腫瘤細(xì)胞未分化時(shí)，抗原表達(dá)呈陰性。
EMA在檢測(cè)上皮組織及其來(lái)源的腫瘤組織時(shí)，抗原表達(dá)陽(yáng)性，在檢測(cè)非上皮來(lái)源的腫瘤如漿細(xì)胞瘤，滑膜內(nèi)瘤，上皮樣內(nèi)瘤，平滑肌內(nèi)瘤，神經(jīng)鞘瘤，及來(lái)惡性神經(jīng)鞘瘤時(shí)，抗原也可表達(dá)為部分陽(yáng)性。因此認(rèn)為：EMA不是上皮性來(lái)源腫瘤所*的標(biāo)記物，它的特異性不高。
該 抗體適用范圍廣，適合于各種類型的切片，應(yīng)用真空負(fù)壓LSAB法檢測(cè)時(shí)，稀釋度在1：100。
3.癌胚抗原（Carcinombryonic antigen ,CEA）
自1965年Go等從結(jié)腸癌分離出一種腫瘤的相關(guān)抗原后，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的研究后發(fā)現(xiàn)，它存在于胎兒的腸里，由于人們將其稱為癌胚抗原。在實(shí)際應(yīng)用中，CEA是一種廣譜的標(biāo)記物。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，它對(duì)胃癌，腸癌，肺癌，乳腺癌，胰腺癌，子宮頸癌，子宮體腺癌，卵巢癌，皮膚鱗狀細(xì)胞癌，膀胱移行上皮癌，食道癌等，抗原表達(dá)陽(yáng)性，在上述的同類組織及癌旁類性組織，也可見到陽(yáng)性物，有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，用CEA標(biāo)記滑膜內(nèi)瘤，間皮瘤，上皮樣內(nèi)瘤和腦膜瘤，也可表達(dá)陽(yáng)性。
目前，CEA有兩種產(chǎn)品，一是單克隆抗體，另一是多克隆抗體。
①單克隆小鼠抗 人CEA，克隆為A5B7。
該抗體的特點(diǎn)，純度高，雜質(zhì)含量少，很少引起非特異性染色，同時(shí)，也不與含糖蛋白的物質(zhì)起反應(yīng)，因此，背景清晰干凈。
該抗體可檢測(cè)上述的病種及其來(lái)源的組織，適用于各種切片的染色。稀釋度為1：100。
②兔抗人CEA。該抗體為多克隆抗體，純度不如①號(hào)抗體，檢測(cè)及適應(yīng)與①號(hào)抗體相同，但效果不如①號(hào)抗體，且較容易產(chǎn)生背景。稀釋度在1：300。
4.山羊抗人甲胎蛋白（Goat anti human alphafeloprotein,AFP）
AFP主要由胎兒肝細(xì)胞和卵黃細(xì)胞產(chǎn)生的一種酸性糖蛋白少量由胎兒的胸腺、肺、胃、腸道的細(xì)胞產(chǎn)生。AFP也不是一種肝癌*的標(biāo)記物。初用時(shí)把AFP作為原發(fā)性肝癌的一項(xiàng)特異性診斷指標(biāo)。隨著免疫組化的深入開展和研究的深入進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：AFP的升高不僅在原發(fā)性肝細(xì)胞癌的病例，在生殖細(xì)胞腫瘤卵黃瘤和睪丸胚胎癌的病例也可大量見到。
用AFP檢測(cè)后顯示陽(yáng)性的病例有：原發(fā)性肝細(xì)胞癌，胃癌，卵黃 瘤和睪丸胚胎癌等。其陽(yáng)性 表達(dá)部位主要在細(xì)胞漿，也有少量在細(xì)胞膜和細(xì)胞核上。
該抗體適合于各種切片的標(biāo)記，可用任何一種 免疫 方法來(lái)進(jìn)行染色，稀釋度為1：100-1：300。
上述四種類型的抗體可作為來(lái)源于上皮的腫瘤及其它來(lái)源的腫瘤的區(qū)別。只要損傷正確，抗體的質(zhì)量沒問(wèn)題，就可獲得滿意的結(jié)果。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的組織，不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)，來(lái)選擇合適的抗體。當(dāng)然有的腫瘤決不是用一兩種抗體就能夠把它們給予區(qū)分開來(lái)。因此，要根據(jù)不同的情況合理使用抗體，以便作出正確的診斷。

（二）常用的間葉源性組織及其腫瘤的檢測(cè)抗體
間葉源性組織范圍廣，內(nèi)容多，它包括肌肉，纖維結(jié)締組織，脂肪，血管，周圍神經(jīng)，骨，軟骨，淋巴等組織。由于這方面涉及的東西較多且較復(fù)雜，因而在上述方面所發(fā)生的腫瘤，是腫瘤病理學(xué)中zui棘手和zui疑難的問(wèn)題之一。隨著免疫組化技術(shù)在腫瘤鑒別診斷中的應(yīng)用，已經(jīng)克服了許多以往無(wú)法克服或者難以克服的問(wèn)題。當(dāng)前，應(yīng)用于這方面檢測(cè)的抗體越來(lái)越多，下面將介紹幾種常用的抗體：
1.波形蛋白（Vimentin ,Vim）
Vim是原始的中間絲，它存在于所有的間葉組織細(xì)胞中，可以向神經(jīng)膠質(zhì)，肌源性細(xì)胞和上皮細(xì)胞中間絲演變。Vim是一種單克隆抗體，臨床應(yīng)用來(lái)作鑒別診斷的有：鑒別癌與內(nèi)癌，前者陰性，后者陽(yáng)性；鑒別小細(xì)胞性腫瘤，這時(shí)應(yīng)多用幾種抗體，如CK，LCA和Vim，如為淋巴瘤，尤文氏瘤或神經(jīng)母細(xì)胞瘤，Vim為陽(yáng)性；鑒別黑色素瘤和低分化癌時(shí)，Vim陽(yáng)性。
應(yīng)用Vim檢測(cè)腫瘤陽(yáng)性的有：HDR-S細(xì)胞，B免疫母細(xì)胞形淋巴瘤，漿細(xì)胞瘤，T 免疫母細(xì)胞及多形性T 淋巴瘤，平滑肌瘤和肉瘤，纖維瘤和肉瘤，脂肪瘤和肉瘤，橫紋肌肉瘤，血管瘤，粘液瘤，神經(jīng)纖維瘤，鞘瘤，惡性神經(jīng)鞘瘤，惡性纖維組織細(xì)胞瘤，纖維組織細(xì)胞瘤，惡性巨細(xì)胞瘤，間葉肉瘤，骨瘤和骨肉瘤，骨巨細(xì)胞瘤，軟骨細(xì)胞瘤，骨軟骨瘤，軟骨母細(xì)胞瘤，軟骨肉瘤，滑膜肉瘤，精原細(xì)胞瘤，黑色素瘤和惡性黑色素瘤，脊索瘤癌肉瘤，尤文 氏瘤，腦膜瘤，卵泡膜細(xì)胞瘤，顆顆細(xì)胞瘤，間皮瘤，等等。
在正常組織中，Vim標(biāo)記陽(yáng)性組織的有：
平滑肌和橫紋膠肌細(xì)胞，肺泡吞噬細(xì)胞，血管及內(nèi)皮細(xì)胞，肝臟枯否氏細(xì)胞，滑膜細(xì)胞，漿細(xì)胞，奇形細(xì)胞，室管膜細(xì)胞，卵巢顆粒細(xì)胞，黑色素細(xì)胞等。
Vim是目前用來(lái)鑒別上皮性腫瘤還是間葉源性鐵常用抗體之一，不過(guò)，在應(yīng)用于鑒別腫瘤時(shí)，應(yīng)多選用幾種抗體。
Vim的抗體現(xiàn)市售的有幾種：
⑴單克隆小鼠抗Vim克隆3B4，該抗體稀釋度較高，可在1：200，它適用于各種切片，但在使用前必須抗原修復(fù)。
⑵克隆小鼠抗豬Vim，克隆V9，該抗體較早前使用，從已檢測(cè)的大量病例情況分析，該抗體效果不錯(cuò)。但該抗體zui大的缺點(diǎn)是稀釋度較不理想，僅在1：10左右，由于稀釋度不大，標(biāo)記的例數(shù)較少，成本較高，現(xiàn)已較少使用。
⒉Von Willebrand因子。
這種抗體在舊叫法中被稱為第Ⅷ因子相關(guān)抗原，如今被 稱為Von Willebrand因子，它可在各種內(nèi)皮細(xì)胞和巨核細(xì)胞的胞漿中找到，因此在臨床的應(yīng)用中，它常被用來(lái)檢測(cè)由內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源的各種腫瘤，同時(shí)也用來(lái)檢測(cè)骨髓標(biāo)本中巨核細(xì)胞的增殖。該抗體使用前須做抗原修復(fù)。注意抗體有單抗 及多抗之分。
⒊CD34
該抗體被認(rèn)為是一種穩(wěn)定的，可靠的血管內(nèi)皮細(xì)胞及其來(lái)源的腫瘤的標(biāo)記物。它對(duì)毛細(xì)血管，小血管內(nèi)皮細(xì)胞顯示強(qiáng)陽(yáng)性，對(duì)中至大血管內(nèi)皮細(xì)胞量選擇性陽(yáng)性，對(duì)軟組織腫瘤，腫瘤 毛細(xì)血管，血管管和血管肉瘤的內(nèi)皮細(xì)胞呈陽(yáng)性，對(duì)淋巴管內(nèi)皮陰性。使用時(shí)須做 抗原修復(fù)。
⒋CD31
該抗體與CD34的標(biāo)記范圍基本一樣。

（三）肌組織及其相關(guān)腫瘤的常用抗體
1.肌間線蛋白（Desmin,DM）
在橫紋肌的微細(xì)結(jié)構(gòu)中，有明暗帶之分，在明暗帶的中央有一薄膜稱為工膜。在心肌纖維結(jié)構(gòu)中，也有相似的工膜。這些結(jié)構(gòu)的主要成份就是由肌間線蛋白構(gòu)成的。此外，在心肌的閏盤，平滑肌中，也含有肌間線蛋白。
Desmin為一種中間絲蛋白，正常時(shí)可分布于平滑肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞骨骼骨細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞。臨床應(yīng)用時(shí)常用來(lái)檢測(cè)上述細(xì)胞來(lái)源的腫瘤如子宮肌瘤及肉瘤，胃，腸道 肌源性腫瘤各形，橫紋肌肉瘤和肌上皮瘤等。
該抗體適應(yīng)于各種組織切片，經(jīng)抗原修復(fù)后結(jié)果更佳。
2.肌球蛋白（Myosin）
骨髓肌的微細(xì)結(jié)構(gòu)在電鏡下可見到肌原纖維是由1-2千條平行的肌絲集成的來(lái)組成，肌絲分為粗肌絲和細(xì)肌絲兩種。粗肌絲由許多豆芽狀的肌球蛋白組成。在心肌和平滑肌發(fā)育分化中期，也可見到肌球蛋白。
目前，臨床應(yīng)用的有兩種抗體。
①M(fèi)yosin（skeletal）
這種抗體用于檢測(cè)骨髓肌及其來(lái)源的腫瘤它適合于各種切片，抗原修復(fù)后結(jié)果更好。
②Myosin（smooth Muscle）
這種抗體用于檢測(cè)肌上皮及平滑肌細(xì)胞以及這方面來(lái)源的腫瘤，它適合于各種組織切片，抗原修復(fù)后可獲得更好的結(jié)果。
3.肌動(dòng)蛋白（Actin）
肌原纖維由兩種成分組成，細(xì)肌絲和粗肌絲。細(xì)肌絲則由肌動(dòng)蛋白，原肌球蛋白和肌原蛋白三種成分組成，其中的肌動(dòng)蛋白，其分子呈球狀，它們互相連接形成長(zhǎng)鏈，每一條細(xì)肌絲都由兩條肌動(dòng)蛋白分子所構(gòu)成。
現(xiàn)臨床用于檢測(cè)肌動(dòng)蛋白的抗體有如下幾種：
①單克隆小鼠抗人肌動(dòng)蛋白，克隆為HHF35。它是一種廣譜標(biāo)記抗體，既可以用于檢測(cè)骨髓肌和骨髓肌來(lái)源的腫瘤，也可以用于檢測(cè)平滑肌，血管平滑肌，心肌，肌上皮細(xì)胞及其來(lái)源的腫瘤，它適合各種組織切片，不用微波抗原修復(fù)，也能獲得很好的結(jié)果。稀釋度為1：100。
②單克隆小鼠抗人肌動(dòng)蛋白（平滑肌）克隆為1A4。該抗體主要用于檢測(cè)平滑肌，心肌，血管平滑肌，肌上皮細(xì)胞及其來(lái)源的各種腫瘤，實(shí)驗(yàn)證明，毛細(xì)血管也可被清楚地顯示出來(lái)。它適合各種切片，稀釋度為1：100。

（四）淋巴組織及相關(guān)腫瘤檢測(cè)的常用抗體
淋巴組織的腫瘤成分較為復(fù)雜，有些與其它上皮來(lái)源的腫瘤在形態(tài)上較相似，鑒別較困難。因而免疫組化對(duì)淋巴組織腫瘤的定性較準(zhǔn)確。淋巴瘤是原發(fā)于淋巴結(jié)和淋巴結(jié)以外各種淋巴組織的惡性腫瘤。根據(jù)瘤細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)不同，把它們分成兩大類即何杰金病（Hodgkins disease,HD）和非何杰金淋巴瘤，（Non-hodgkins lymphoma,NHL）。
應(yīng)用抗體來(lái)檢測(cè)淋巴瘤的抗體目前有很多，光CD系列就有百余種，雖然各類繁多，但臨床常用的抗體，主要有以下幾種：
1.LCA（Leucoyte common antigen）
該抗體主要用于檢測(cè)正常白細(xì)胞即淋巴細(xì)胞（T.B），粒細(xì)胞，組織細(xì)胞和單核細(xì)胞及其來(lái)源的腫瘤。適合各種切片，不需特別處理。稀釋度1：200。
2.T細(xì)胞
T淋巴細(xì)胞在胸腺中進(jìn)行分裂分化，形成了具有各種特異性抗原受體的T細(xì)胞，因此它又被 稱為胸腺依賴細(xì)胞。T細(xì)胞數(shù)量zui多，功能又是多方面的根據(jù)它們的功能可將其分為 輔助T細(xì)胞，抑制T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞。
T淋巴細(xì)胞在淋巴結(jié)的分布通常在副皮質(zhì)區(qū)，因此免疫組化顯色后，在副皮質(zhì)區(qū)可找到陽(yáng)性細(xì)胞，臨床常用的有兩種抗體。
①T細(xì)胞，CD45RO克隆為人WHL-1
該抗體幾乎可標(biāo)記所有的胸腺細(xì)胞還可檢測(cè)CD4和CD8以及成熟活化T細(xì)胞的靜止T細(xì)胞亞群及其來(lái)源的淋巴瘤細(xì)胞，該抗體適合于各種切片，不需各種處理方法，仍可獲得很好的結(jié)果，稀釋度為1：100。
②T 細(xì)胞，CD3，克隆為PS1
該抗體用來(lái)檢測(cè)正常和新生的T細(xì)胞，對(duì)早期的T細(xì)胞有較高的特異性。雖然它的特異性較高，但敏感性不如①號(hào)抗體。臨床應(yīng)用時(shí)，可兩種抗體同時(shí)應(yīng)用，以利于提高診斷的準(zhǔn)確率。它不需各種方法處理。稀釋度為1：100。
3.B細(xì)胞，CD20 克隆為L(zhǎng)26
B淋巴細(xì)胞跟T淋巴細(xì)胞不一樣，它的分化分裂是在胚胎肝及骨髓內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，在淋巴結(jié)中的B淋巴細(xì)胞，主要分布在濾泡反應(yīng)中心。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，反應(yīng)中心是B細(xì)胞各個(gè)時(shí)期轉(zhuǎn)化的場(chǎng)所，基本上需經(jīng)四個(gè)時(shí)期：
*期成熟的小淋巴細(xì)胞接受抗原信息后體積逐漸增大，細(xì)胞核表面出現(xiàn)凹陷或溝紋似裂隙被稱為小核裂細(xì)胞。第二期細(xì)胞繼續(xù)增大，核周圍有少量胞漿，如此被 稱為大核裂細(xì)胞。第三期核逐漸變化發(fā)展，成為圓形或橢圓形，裂 紋也隨著變化而消失，核內(nèi)出現(xiàn)核仁，胞漿增多，RNA和蛋白質(zhì)合成相繼增多，此時(shí)被稱為小無(wú)核裂細(xì)胞。第四期，細(xì)胞繼續(xù)增大，比原來(lái)的小淋巴細(xì)胞大好幾倍，核呈圓形或橢圓形，可見核分裂，胞漿豐富，被 稱為大無(wú)核 裂細(xì)胞。由于B細(xì)胞在不同時(shí)期的變化，因此在標(biāo)記時(shí)，應(yīng)使用不同類型的抗體，對(duì)其不同時(shí)期進(jìn)行標(biāo)記和判斷。
在臨床應(yīng)用中，檢測(cè)淋淋巴瘤不象研究淋巴瘤，那樣細(xì)致，只要將其分形就可以了。
該抗體不需特殊處理，稀釋度為1：100。
4.骨髓組織細(xì)胞抗原，克隆：Mac387
應(yīng)用抗體的呈色可將淋巴瘤分為三大類形即T、B淋巴細(xì)胞形和組織細(xì)胞形。該抗體可檢測(cè)正常的粒細(xì)胞，血液中單核細(xì)胞和組織中的組織細(xì)胞及其來(lái)源的腫瘤。
該抗體不需特殊的處理方法，稀釋度為1：100。
5.CD29
該抗體主要用于標(biāo)記B 細(xì)胞主要用于，B細(xì)胞淋巴瘤，B細(xì)胞白血病等的鑒別診斷，標(biāo)記時(shí)應(yīng)做抗原修復(fù)。
6.CD56

（五）神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌及其有關(guān)腫瘤抗體
1.神經(jīng)無(wú)特異性烯醇化酶（Neuron-specific enolase,NSE）
經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)腦組織中有三種同2酶即dd.dr和rr。NSE屬于rr形。它不僅存在于神經(jīng)細(xì)胞及其軸突中，而且存在于各種內(nèi)分泌細(xì)胞及其有關(guān)腫瘤細(xì)胞內(nèi)。有人做過(guò)實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用NSE檢測(cè)69例APUD系統(tǒng)腫瘤，均表達(dá)為陽(yáng)性，在16例外分泌腺如胰腺癌的檢測(cè)中 僅有2例陽(yáng)性。可見NSE對(duì)于檢測(cè)APUD系統(tǒng)方面的腫瘤是一個(gè)很有用的抗體。它適合于各種組織切片，有單克隆和多克隆兩種抗體，應(yīng)用抗原修復(fù)，可獲得更佳結(jié)果。
2.嗜鉻蛋白A（chromogranin A）
該抗體可檢測(cè) 神經(jīng)無(wú)和 神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及其來(lái)源的腫瘤如：嗜鉻細(xì)胞瘤，甲狀腺髓樣癌，胰島細(xì)胞瘤，垂體腫瘤，類癌等。抗體分為單抗 和多抗，可適合于各類切片，需做抗原修復(fù)。
3.膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrilary acidic protein,GFAP）克隆為6F2
GFAP是中間絲蛋白之一，是星形細(xì)胞和室管膜細(xì)胞及其來(lái)源腫瘤的有效標(biāo)記物，據(jù)對(duì)60例星形細(xì)胞瘤的免疫組化顯示，其結(jié)果均為陽(yáng)性。因此，它是星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤和室 管膜瘤的抗體。早期使用的有多克隆抗體，近來(lái)使用的為單克隆抗體，不需要作任何的處理，適應(yīng)于各種切片。
4.S-100
S-100是從牛腦中分離出來(lái)的一種蛋白，經(jīng)大量的研究發(fā)現(xiàn)。它有三種亞形，S-100ao、S-100a和S-100b。它在人的雪旺氏細(xì)胞，室管膜細(xì)胞，星形細(xì)胞， 神經(jīng)纖維，神經(jīng)鞘，皮膚黑色素細(xì)胞等都可檢測(cè)到。因此，它可用于檢測(cè)上述組織及其來(lái)源的腫瘤。
該抗體適合于各種切片，不需任何處理，可獲很好結(jié)果。稀釋度為1：200，應(yīng)盡量控制背景。

（六）其它
1.甲狀腺球蛋白（Thyroglobulin,TG）克隆為2H11
TG是甲狀腺濾泡細(xì)胞合成的一種糖白，由于它的特殊關(guān)系，是眾多抗體中特異性較高的一種抗體，僅用于檢測(cè)甲狀腺組織及其來(lái)源的腫瘤，不需任何處理，可獲很好結(jié)果，適應(yīng)于各種切片，但應(yīng)請(qǐng)注意控制背景。
2.乳頭狀瘤病毒（Bovine Dapiuomavirus,BPV）
該抗體主要用于檢測(cè)生殖系統(tǒng)傳染性的疾病如尖銳濕疣，病毒存在于上皮的挖空細(xì)胞中，根據(jù)實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，在檢測(cè)顯色后，并非所有的挖空細(xì)胞都含有病毒，這可能是由于切片或者在制片的過(guò)程中，保存不好而丟失。在50例病例的標(biāo)記中，均可見到含量不等的病毒。該抗體為多克隆抗體，應(yīng)用真空負(fù)壓檢測(cè)時(shí)，稀釋度可為1：400，應(yīng)注意背景的控制，不經(jīng)任何處理，也可獲得很好的結(jié)果，適用于各種切片。
3.增殖細(xì)胞核抗原（Proliferation cell nuclear antigen,PCNA）
它是一種酸性蛋白，分子量36KD，在DNA復(fù)制時(shí)為 DNA聚合酶的輔助物，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期時(shí)，此蛋白即已出現(xiàn)。它是細(xì)胞增殖周期的標(biāo)記物，尤其是“S”期。適用 于各種切片。
4.牛堿性磷酸酶（Cow calf alkaline phosphalase,CAP）
該抗體可檢測(cè)正常的成骨細(xì)胞，小腸細(xì)胞，前列腺上皮細(xì)胞，全身含有CAP的細(xì)胞。但臨床常用它來(lái)檢測(cè)骨腫瘤及前列腺腫瘤CAP的含量，該抗體不需作任何處理，適合于各種切片。
5.雌激素受體，（Estrogen receptor ,ER）
ER是一種具有特定功能的酸性蛋白，是傳遞激素信息的一種特異性的物質(zhì)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，這種物質(zhì)存在于癌細(xì)胞的細(xì)胞核中，如乳腺癌、子宮內(nèi)膜腺癌，宮頸癌等癌細(xì)胞核中。目前，臨床在治療這些癌癥病人時(shí)，首先需要檢測(cè)ER是否陽(yáng)性，如為陽(yáng)性，治療是采用抗激素療法，如為陰性，治療則采用激素療法。總之ER檢測(cè)的陽(yáng)性與否都直接關(guān)系到治療方案的選擇，是判斷患者預(yù)后的硬性指標(biāo)。但是目前檢測(cè)ER時(shí)，必須要做好充分*的抗原修復(fù)，據(jù)實(shí)驗(yàn)認(rèn)為，要取得滿意的結(jié)果就必須要做長(zhǎng)時(shí)間的水浴式的抗原修復(fù)，即將切片浸入抗原修復(fù)液的容器中，然后一起置入鍋中煮沸持續(xù)四十分鐘，如果抗原修復(fù)時(shí)間不夠，不充分，切片也可呈陰性。除此之外，也可采用高壓修復(fù)壓，真空負(fù)壓和微波修復(fù)。
6.孕激素受體（Progesterone receptor ,PR）
PR與ER一樣，在乳腺癌，宮頸癌，子宮內(nèi)膜腺癌等的治療中，都 被列為必須檢測(cè)項(xiàng)目，為制定醫(yī)療方案，判斷預(yù)后硬性指標(biāo)，一般的檢測(cè)都是ER和PR同時(shí)進(jìn)行，但陽(yáng)性可以是兩種都陽(yáng)性或陰性，或一陰一陽(yáng)，它們的檢測(cè)方法，抗原修復(fù)都一樣。